Colunas de HPLC

O nome cromatografia vem da palavra grega Croma que significa cor, e da palavra Graphein que significa escrever. O primeiro uso registrado da cromatografia em coluna remete ao cientista russo Mikhail Tsvet, que esmagou o carbonato de cálcio em um tubo e adicionou folhas de plantas verdes homogeneizadas, seguidas por solvente orgânico. Ele viu bandas coloridas separadas à medida que o solvente passava pelo tubo.

É assim que a cromatografia começou, no início, separando com sucesso vários pigmentos das folhas. Atualmente, há muitos analitos incolores e separados por técnicas cromatográficas, como a cromatografia líquida de alta eficiência (High-Performance Liquid Chromatography, HPLC), que ainda recebem o mesmo nome.

Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC)

É uma forma de cromatografia em coluna que bombeia uma mistura de amostra ou analito em um sistema de solvente comumente conhecido como fase móvel no fluxo especificado através de uma coluna que contém a fase estacionária. A separação do analito acontece com base na interação do analito com a fase móvel e a fase estacionária.

Cromatografia líquida de ultra-alta eficiência (UHPLC)

Essa tecnologia é baseada no princípio de que partículas menores levam a uma maior eficiência, separações mais rápidas com resolução e sensibilidade superiores. No entanto, para tolerar a pressão extrema de partículas menores que 2 μm, o sistema precisa ser capaz de lidar com alta pressão de trabalho. A eficiência que essas colunas produzem não deve ser perdida em nenhum outro lugar no volume morto do instrumento.

Os equipamentos de UHPLC foram projetados para lidar com isso. Como os equipamentos de UHPLC têm um custo elevado, sempre há o desejo de usar o equipamento de HPLC existente e alcançar um desempenho equivalente ao do UHPLC. No final da década de 2000, a Phenomenex lançou colunas de 2,6 μm com a tecnologia Kinetex Core-Shell, que fornecem esse desempenho de UHPLC em um HPLC tradicional.

Modos de separação

Existem muitos modos cromatográficos de separação e cada um tem suas próprias particularidades. Abaixo é apresentada uma árvore de seleção de coluna de HPLC para orientar os leitores a escolherem o modo correto de análise. Embora haja muitos modos de separação disponíveis para resolver misturas cromatograficamente, a separação de fase reversa (reversed phase, rp) é bastante popular e o modo mais comum em cromatografia líquida.

Por que a fase reversa é chamada de fase reversa?

A resposta é simples. A cromatografia evoluiu a partir do uso da fase estacionária polar e da fase móvel não polar como o principal componente de fase móvel e isso foi considerado como prática normal. Por isso, o nome fase normal. Embora esse modo separasse os analitos com base na natureza polar, haviam muitas misturas de analitos que não eram polares e tinham características hidrofóbicas que precisavam de separação. O uso da fase estacionária não polar e da fase móvel polar ajudou a separar esses analitos hidrofóbicos. Uma vez que essa prática é inversa à fase normal, o termo fase reversa é usado. Isso é o mesmo que chamar um jogador de pingue-pongue destro de jogador normal e um jogador de pingue-pongue canhoto de jogador reverso.

Clique aqui e conheça também os processo de separação de fase reversa e os mecanismos primários de interação que ditam o comportamento cromatográfico geral.

 

Autor convidado: Dr. Ramkumar Dhandapani

Tags:

Allcrom, cromatografia

Compartilhe: